白癜风有什么症状图 https://m-mip.39.net/news/mipso_5885336.html-年，国家药典委员会相继公布了年版《中国药典》四部通则高效液相色谱法的三次征求意见稿。与年版药典相比，该意见稿主要修订并增加了色谱参数允许调整的范围、定性分析的方法以及对多维色谱的阐述。对于制药从业者而言，年版《中国药典》中的最大变（福）更（音）要数修订了色谱参数允许调整的范围，即超高效液相色谱（UHPLC）方法的引入。药典的UHPLC时代正式来临！在此之前，收入药典的传统液相色谱方法采用的是4.6*mm，5μ的色谱柱，实验所需时间较长及运行成本较高。而在新版年版药典中，允许色谱参数在一定范围内调整，尤其是允许填料粒径和柱长的变化，这也就官宣UHPLC方法正式引入药典、得到药典认可。与HPLC方法相比，UHPLC方法分析速度更快、运行成本更低、检测结果更准确，如图1对比所示。图1.HPLC与UHPLC方法转换所得结果比对
何为UHPLC方法？
所谓的超高效液相色谱（UHPLC）方法实际是使用小粒径（约2μm）色谱柱所开发的方法，而可以使用该方法的仪器即为超高效液相色谱仪。所以，UHPLC方法的关键仅在于色谱柱粒径，与其它参数以及仪器本身无关。
因变化而变革—L/dp计算柱效，促成UHPLC引入在版药典征求意见稿中，针对色谱柱固定相的要求是不得改变填充剂的理化性质，目的是为了保证色谱柱选择性不变，而全多孔填料与表面多孔填料的转换是被允许的，且规定色谱柱柱长与填充剂粒径的比值（L/dp）仅需在原有数值的-25%~+50%之间即可。版药典征求意见稿允许L/dp变化，其实是允许对方法分离度进行微调。如若需要获得与之前完全相同的分离度，则L/dp应保持不变；如若此前分离度良好，需缩短分析时间，则L/dp最大降低25%；如若需要借助UHPLC方法进一步提高分离度，则L/dp最大提升50%。这说明了在进行HPLC到UHPLC方法转换时，从色谱柱的角度讲，只有L和dp一定会发生改变，其它诸如内径等参数都可以保持不变。AgilentInfinityLabPoroshell色谱柱，采用表面多孔核-壳填料颗粒，可在极低的反压下获得类似于亚2μm填料色谱柱的分离效果。让耐压仅有bar、bar的老仪器也可开发UHPLC方法。谁说老将不能应对新挑战，Poroshell第一个不干！
图2.InfinityLabPoroshell色谱柱
HPLC到UHPLC，哪些参数需要改变？填充剂粒径减小，流速增大流速（F）与色谱柱内径（dc）的平方和填料颗粒粒径（dp）的比值成正比，如公式1。在HPLC到UHPLC方法转换过程中，梯度方法的流速可据此公式转换，而等度方法的流速在此公式的基础上最大可继续变化±50%。也就是说对于梯度方法，如果色谱柱内径保持不变（4.6mm），填料颗粒度下降几倍，流速则要上升几倍，该变化间接说明了小颗粒填料色谱柱更适合于高流速（通常为2倍左右），与液相色谱理论中经典的范德姆特方程曲线相符。图4范德姆特方程曲线色谱柱体积缩短，进样体积减少进样体积（Vinj）计算公式，实际上是源于色谱柱的体积公式，即与色谱柱柱长和内径平方成正比。随着UHPLC色谱柱的使用，色谱柱柱长势必会发生改变。如若色谱柱内径保持不变，色谱柱柱长下降几倍，进样体积也是需要下降相应的倍数，但可依据灵敏度进行一定的调整。
改变色谱柱体积以及流速，需调整梯度洗脱条件
梯度洗脱时间（tG），与色谱柱体积成正比，与流速成反比，如公式3。因此在方法转换时，随着色谱柱体积的变化，需对应调整梯度时间表。此外，还需考虑不同系统的体积差异，因此可能涉及到流动相比例的调整，而版药典分别针对等度与梯度条件对流动相比例也有相应的规定。
安捷伦科技公司强大的ISET智能模拟系统，可自动通过模拟目标系统对新方法进行微调，减少流动相比例改动，提高方法转移效率。后面还会有专题介绍这一功（逆）能（天）强（改）大（命）的神器，敬请期待。还有哪些可调整项？除色谱柱柱长与填充剂粒径外，年版《中国药典》征求意见稿也针对流动相缓冲液盐浓度比例、pH值与色谱柱柱温有了一定的规定，均为可调整项，只有检测波长项不允许改变。药典作为制药行业的指导法典，需要相关从业者认真落实并执行。随着版药典首次将UHPLC技术正式引入，并对其做了极为详尽的方法转换规定，制药行业用户无需再纠结UHPLC方法是否合规、是否需要重新验证方法，只需简单的方法确认就可以符合检测要求、满足行业法规，这无疑为广大早已对UHPLC技术摩拳擦掌的用户打下一剂有力的强心针。注：F1：原方法中的流速F2：调整后方法中的流速dc1：原方法中色谱柱的内径dc2：调整后方法中色谱柱的内径dp1：原方法中色谱柱的粒径dp2：调整后方法中色谱柱的粒径Vinj1：原方法中进样体积Vinj2：调整后方法中进样体积L1：原方法中色谱柱柱长L2：调整后方法中色谱柱柱长tG1：原方法的梯度段洗脱时间
tG2：调整后的梯度段洗脱时间
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